1. cKI小鼠模型的定義與核心原理

cKI（條件性敲入） 是在傳統(tǒng)KI（Knock-In）基礎(chǔ)上引入時(shí)空特異性調(diào)控的基因編輯模型，通過Cre-loxP系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的精準(zhǔn)控制：

• 核心元件：

• LoxP-STOP-LoxP（LSL） ：插入靶基因前的轉(zhuǎn)錄終止序列，阻斷基因表達(dá)；Cre酶切除STOP后激活表達(dá) 。

• 組織特異性Cre工具鼠：驅(qū)動(dòng)特定細(xì)胞/器官中Cre重組酶的表達(dá)（如Alb-Cre用于肝臟特異性表達(dá)）。

• 技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

• 避免全身表達(dá)導(dǎo)致的發(fā)育致死或非靶向效應(yīng)

• 模擬疾病相關(guān)基因的局部病理微環(huán)境 

2. 核心構(gòu)建策略與流程

（1）CRISPR/Cas9介導(dǎo)的cKI模型構(gòu)建

（2）經(jīng)典案例解析

• 報(bào)告基因示蹤模型：

• B-CAG-Upar-tdTomato cKI：LSL阻斷mUPAR與tdTomato表達(dá)；CMV-Cre激活后實(shí)現(xiàn)全組織示蹤 。

• Cubn-sGFP-P2A-nLacZ：腎臟特異性熒光標(biāo)記 。

• 疾病人源化模型：

• B6-hLPA(CKI)/Alb-cre：肝臟特異性表達(dá)人源LPA基因，模擬高血脂與動(dòng)脈粥樣硬化 。

3. 核心應(yīng)用場(chǎng)景

（1）精準(zhǔn)疾病機(jī)制研究

（2）藥物研發(fā)平臺(tái)

• 靶點(diǎn)驗(yàn)證：人源化CYP450 cKI模型預(yù)測(cè)藥物代謝毒性 。

• 藥效評(píng)價(jià)：fu方苦參注射液（CKI）在放射性肺損傷模型中的抗炎機(jī)制 。

（3）前沿技術(shù)整合

• 光遺傳學(xué)調(diào)控：結(jié)合ChR2（光敏感通道）cKI小鼠精準(zhǔn)操控神經(jīng)回路 。

• 單細(xì)胞測(cè)序驗(yàn)證：scRNA-seq分析cKI模型腫瘤微環(huán)境重塑

4. 技術(shù)優(yōu)勢(shì)與局限性

優(yōu)勢(shì)

• 時(shí)空精準(zhǔn)性：克服傳統(tǒng)KI模型的全身表達(dá)局限性 。

• 生理相關(guān)性：保留內(nèi)源基因調(diào)控機(jī)制（如啟動(dòng)子特異性）。

• 多功能拓展：支持雙報(bào)告基因（如EGFP+tdTomato）或多基因共編輯 。

局限性

• 技術(shù)復(fù)雜度：需同步優(yōu)化Cas9編輯效率與同源重組設(shè)計(jì) 。

• Cre工具鼠限制：組織特異性Cre活性不足或滲漏表達(dá)影響結(jié)果 。

• 周期與成本：從構(gòu)建到表型分析需6-12個(gè)月 。