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油紅O染色實驗

簡要描述:油紅O染色實驗油紅O脂肪染色法通常應(yīng)用于檢測組織或細(xì)胞內(nèi)的脂肪情況,油性紅O(Oil Red O)是一種脂溶性染料,是很強的脂溶劑和染脂劑,在脂肪內(nèi)能高度溶解,其染色原理是油紅O能特異性地與組織和細(xì)胞內(nèi)的中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白產(chǎn)生吸附作用從而使脂肪染色。

  • 更新時間:2024-03-28
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詳細(xì)介紹

油紅O染色實驗操作方法

(1)冰凍切片厚度 6~10µm,不固定或 10%福爾馬林固定 10min后水洗

(2)切片加入60%的異丙醇內(nèi)浸洗 2min

(3)用冰蒸餾水稍微清洗一遍(說明書沒說明要洗)

(4)切片加入改良油紅 O 染色液中,密閉染色 10~15min,該過程注意避光

(5)用冰蒸餾水清洗一遍(說明書沒說明要洗)

(6)加入 60%的異丙醇內(nèi)稍洗以去除染液(大約幾秒)

(7)加入冰蒸餾水中稍微清洗一遍

(8)Mayer 蘇mu素染色液復(fù)染核 5min

(9)用冰蒸餾水清洗一遍

(10)片子用濾紙吸干水分

(11)用甘油明膠或阿拉伯糖膠封片。

油紅O染色實驗注意事項

1. 石蠟切片不能用于油紅O染色,原因在于石蠟包埋過程中需要脫水,脫水過程中需要乙醇-二甲苯和石蠟,二甲苯是有機溶劑,會把中性脂肪溶解;

2. 冰凍切片準(zhǔn)備時,包埋的降溫過程建議選擇干冰,原因在于若選擇液氮降溫過程較強烈,可能導(dǎo)致組織內(nèi)部炸裂,而干冰降溫的過程比較緩和,染出來的片子比較好看;

3. 切片的厚度要稍微厚一些,建議選擇8-10μm;

4. 實驗設(shè)計建議設(shè)計陰性對照和陽性對照,如陽性對照可以用脂質(zhì)豐富的肝臟組織等,陰性對照可以根據(jù)文獻來選擇無脂肪沉積的組織。


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